OBJETIVO
Origin es un programa que tiene distintos módulos, es decir, aplicaciones de instalación individualizada. Así por ejemplo la versión que nosotros usaremos posee un módulo para la realización de gráficos, ajuste de datos a ecuaciones, etc. Y otro módulo que permite el control, la adquisición y procesado de datos de un calorímetro diferencial de barrido (DSC). Nosotros usaremos ahora el primer módulo.
La espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier es una técnica biofísica que nos permite estudiar cambios en la estructura secundaria y terciaria de las proteínas. Hay una región del espectro de infrarrojo, llamada Amida I, que es sensible a la conformación de las proteínas y péptidos. Cuando una proteína experimenta un calentamiento progresivo se desnaturaliza, y este proceso tiene un punto de temperatura crítica que se conoce Tm. Pues bien, aprovecharemos la forma de la banda amida I para estimar esta Tm a partir de datos reales obtenidos en nuestro laboratorio para dos serotipos distintos de la toxina botulínica: serotipo A (BONT A) y E (BONT E). El investigador se pregunta de que forma afecta la fosforilación por una tirosina-quinasa llamada Src a la Tm de ambos serotipos.
En esta figura se muestra un espectro de infrarrojo de una de estas proteínas a 20ºC y otro a 70ºC en la región de la amida I (1700-1600 cm-1) en sus formas no fosforilada (control) y fosforilada.
BONT A :Traza continua (control) y discontinua (fosforilada).
El experimento de infrarrojo consiste en tomar 15 espectros durante un proceso de aumento escalonado de la temperatura que dura unas 2.5 horas. Es posible estimas la Tm de estas proteínas representando la anchura medida a la mitad de la altura de estos espectros frente a la temperatura a que ha sido tomado el espectro.
ELEMENTOS DE PARTIDA
Después de realizar el experimento y hacer las medidas oportunas disponemos de la siguiente tabla de datos, que muestra el parámetro AMA (Anchura de la banda Amida I' a mitad de su altura) frente al aumento de la temperatura:
EVALUACIÓN
El alumno debe construir a partir de los datos recogidos en esta tabla una gráfica que represente la AMA de cada serotipo en sus formas control y fosforilada frente a la temperatura a que fue tomado el espectro de infrarrojo. Para ello utilizará el programa Origin.
Como orientación se presenta la figura siguiente con el trabajo pedido:
SOFTWARE
Microcal Origin v7.0.